【文献速递】细胞表面波形蛋白阳性(CSV-) CTC 可作为儿童肉瘤的预后标志物

首页    新闻    首页-左    【文献速递】细胞表面波形蛋白阳性(CSV-) CTC 可作为儿童肉瘤的预后标志物

 

近日,美国德克萨斯大学 MD 安德森癌症中心的Long Dao等在frontiers in Oncology杂志上发表了一篇题为:Prognostic Value of Cell-Surface Vimentin-Positive CTCs in Pediatric Sarcomas(细胞表面波形蛋白阳性 CTC 在儿童肉瘤中的预后价值)的文章,首次在文献中报道了细胞表面波形蛋白 (CSV+) CTC 作为儿童肉瘤的标志物研究。

C:\Users\Administrator\OneDrive\图片\文章配图\20220106CSV\微信截图_20220106091257.png

 

背景介绍

 

目前,复发/转移性软组织肉瘤患者的 5 年总生存率仍低于35%。至今没有可用的生物标志物来评估肉瘤患者的疾病状态,疾病监测依赖于连续成像,容易增加继发性恶性肿瘤的风险,加剧患者的焦虑。

液体活检,由于其不需要重复成像和频繁镇静,所以尤其适用于儿童。但是,循环肿瘤细胞 (CTC) 在儿童和青少年肉瘤人群中的研究并不多见。

CTC,因其稀有性而难以表征,许多CTC捕获技术,包括 FDA 批准的 Cellsearch,只能分离表达上皮细胞粘附分子 (EPCAM) 的 CTC。然而,肉瘤通常不表达这种蛋白质,不能以这种方式分离它们的 CTC。我们之前的研究表明,细胞表面波形蛋白 (CSV) 是 CTC 的通用标志物。因此,我们开发了一种自动化微流体系统,用于从小儿肉瘤患者的外周血中分离和计数CSV + CTC。

本研究的主要目的:使用 CSV 抗体捕获从各种肉瘤患者中分离 CTC。

我们进一步证实了:

1. 活动性肉瘤患者比长期幸存者具有更多的 CTC;

2. 我们的技术能够区分活动性肉瘤患者和长期生存者,并具有高度的敏感性和特异性。

3. 我们使用分子数据和 CSV + CTC 计数的组合,证明了CSV + CTC 和缺乏基因变异、扩增和融合,与明显的生存优势相关。

 

材料和方法

 

本研究从 72 名患有活动性肉瘤的患者和 20 名对照者收集外周全血样本。通过手动和自动两种方法分离CTC,对肉瘤患者血液中的细胞表面波形蛋白 (CSV+) CTC,结合肉瘤的基因突变进行分析。

· 入组人群(活动性肉瘤):在 2014 年 1 月至 2020 年 1 月期间就诊于德克萨斯大学 MD 安德森癌症中心儿童和青少年科确诊为任何疾病阶段的肉瘤的患者。

· 对照组(长期生存者):至少 5 年前完成治疗,在入组前未复发的肉瘤患者。

·  排除标准:在样本收集后 30 天内接受过化疗的患者被排除在分析之外。

 

C:\Users\Administrator\OneDrive\图片\文章配图\20220106CSV\微信截图_20220106091418.png

表1:患者特征

 

 

结    果

 

我们根据检测信息构建了受试者工作特征曲线(ROC),AUC 为 0.831,敏感性为 85.3%,特异性为 75%。我们发现与 CSV+ CTC 阴性的患者相比,CSV+ CTC 阳性的患者的总体生存率更差。此外,使用可用的分子检测可以提高我们诊断和预后检测的准确性。

 

·  CSV + CTC 的手动和自动捕获产生类似的结果。

我们先用前述手动隔离方法来捕获和鉴定CTC,然后开发了一种自动化技术(图 1B),以确保结果的可重复性。自动化方法可以捕获和分离任何类型肉瘤患者血液中的 CTC(图 1D)。为了保证这两组数据的一致性,我们进行了统计比较(图 1C),这两个方法在分离和计数 CTC 的能力方面没有显着差异。

C:\Users\Administrator\OneDrive\图片\文章配图\20220106CSV\微信截图_20220106091407.png

图1:从肉瘤患者中分离 CSV+CTC

 

·  CSV +细胞是 CTC。

我们以前通过FISH分析,肿瘤细胞峰值测定(spike assay),和测序分析证实所捕获的CSV +的CTC是肿瘤细胞。为了进一步验证这些观察结果,我们用血管肉瘤生物标志物 CD31 对血管肉瘤患者的 CTC 染色,并通过用平滑肌肌动蛋白染色胚胎横纹肌肉瘤患者的 CTC 来证实这一点(图 1E)。CD31 和平滑肌肌动蛋白的表达分别证实观察到的 CSV +细胞确实是血管肉瘤和胚胎横纹肌肉瘤 CTC。这些数据,连同我们曾经报道的致癌基因扩增,证实我们的技术捕获的 CSV +细胞确实是肿瘤细胞。

 

·  与长期生存者相比,活动性肉瘤患者血液中的CSV+CTC 含量更高。

我们发现活动性肉瘤患者 6mL 血液中的CSV + CTC显著多于长期生存者(p<0.0001)(图 2A)。试验组 6 毫升血液CSV + CTC数量0-26 个,其中有17 名未检测到 CSV +CTC。在 20 个对照样本中,有 5 个检测到CSV+CTC,但CTC的数量很少,每 6 毫升血液中有 0-3 个 CTC。

C:\Users\Administrator\OneDrive\图片\文章配图\20220106CSV\微信截图_20220106091426.png

图2:活动性肉瘤患者血液中的CSV+CTC升高

 

·  CSV + CTCs 检测肉瘤的敏感性和特异性。

我们构建受试者工作特征曲线(ROC)(图 2B),曲线下面积 (AUC) 为 0.831。由于 Youden J值为每 6 mL 血液 1 个或更多 CTC,因此该水平被用作 CTC 阳性的临界值。阈值为 1 时,灵敏度和特异性分别为 75% 和 85.3%。
为了进一步提高测试的灵敏度和特异性,我们增加了在标准护理过程中获得的基因生物标志物测试结果。结果,ROC曲线考虑到表2中所列的基因突变, AUC 增加到 0.875 (图 2C),最大组合敏感性和特异性分别为 75% 和 91.2%。

 

C:\Users\Administrator\OneDrive\图片\文章配图\20220106CSV\微信截图_20220106091438.png

表2:突变检查

 

C:\Users\Administrator\OneDrive\图片\文章配图\20220106CSV\微信截图_20220106091447.png

图3:CTC+突变(活动性肉瘤患者)与总生存期

 

结    论

 

我们的研究结果表明 CSV+ CTC 具有预后价值,并且可能作为疾病负担的衡量标准。

 

参考文献:

1. Long Dao et al, Prognostic Value of Cell-Surface Vimentin-Positive CTCs in Pediatric Sarcomas. Front Oncol. 2021 Dec 9;11:760267.

 

 

华得森CTC上皮间质分型检测试剂盒

 

华得森拥有国内独家授权的CSV抗体,配合自主研发的国家药监局批准的CTC三类证平台——CytoSorter®循环肿瘤细胞检测系统,为临床专家和肿瘤患者提供CTC检测服务,助力临床肿瘤精准诊疗!欢迎垂询!

C:\Users\Administrator\OneDrive\图片\文章配图\20220106CSV\微信截图_20220106101722.png

 

 

 

 
2022年1月11日 11:19